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數(shù)字PCR

技術(shù)介紹:
數(shù)字PCR釆用絕對定量的方式,不依賴于標準曲線和參照樣本,直接檢測目標序列的拷貝數(shù),它的原理是通過微液滴數(shù)字PCR技術(shù)結(jié)合Taqman熒光探針技術(shù),利用微流控生物芯片可以生成數(shù)萬個納升級油包水液滴,液滴中包裹了單拷貝模板和PCR反應液。每個微液滴即一個反應單元,經(jīng) PCR 擴增后,生物芯片分析儀對微滴逐個進行熒光強度檢測。與陰性微滴相比,包含核酸分子的陽性微滴的熒光信號強度增加。每個反應單元所含的模板分子個數(shù)符合泊松分布數(shù)學模型,最后通過測定每個反應單元的熒光信號并結(jié)合泊松分布計算岀待測樣本靶標信號的絕對拷貝數(shù)。
數(shù)字PCR在腫瘤液體活檢領(lǐng)域可做到風險評估、早期篩查、病理診斷、伴隨診斷、用藥指導、預后評估、療效檢測、微小殘留監(jiān)測這些應用。
檢測優(yōu)勢:
a.無需標準曲線和參照樣本即可實現(xiàn)絕對定量
b.可單分子檢測,靈敏度高,可達0.1%
c.終點檢測,不依賴于Ct值,且對PCR抑制劑耐受程度高
d.高穩(wěn)定性和較強的抗干擾能力,適用于多種復雜樣本
e.封閉式防污染設計
f.動態(tài)檢測,可重復性高
g.高信噪比
h.血液檢測無創(chuàng),樣本易采集,易復檢

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